So funktioniert die Zählkammer
Die Neubauer-Zählkammer ist ein Objektträger mit eingeätztem Raster und genau definierter Tiefe. Ein Großquadrat in den Ecken der improved-Variante misst einen Millimeter mal einen Millimeter, die Kammertiefe beträgt 0,1 Millimeter. Über einem Großquadrat liegt damit ein Volumen von 0,1 Mikrolitern. Wer die Zellen darin zählt, kennt die Zellzahl in diesem winzigen Volumen.
Für die Umrechnung auf einen Milliliter wird der Mittelwert pro Großquadrat mit 10.000 multipliziert, weil ein Milliliter 10.000-mal so groß ist wie 0,1 Mikroliter. Hinzu kommt der Verdünnungsfaktor, etwa durch das Mischen mit Trypanblau im Verhältnis 1:1. Für andere Kammertypen oder kleinere Quadrate können Sie den Kammerfaktor anpassen.
Trypanblau dringt nur in Zellen mit geschädigter Membran ein und färbt sie blau. Lebende Zellen bleiben hell. Aus beiden Zählungen ergibt sich die Vitalität in Prozent. Der Rechner gibt die lebenden Zellen pro Milliliter, die Gesamtzellzahl, die Zahl lebender Zellen in der ganzen Suspension und das Volumen für eine gewünschte Aussaatmenge aus.
Sauber zählen
Die Genauigkeit hängt vor allem von der Zahl der gezählten Zellen ab. Liegen pro Großquadrat weniger als etwa 20 Zellen, wird das Ergebnis statistisch unsicher; dann zählen Sie mehr Quadrate oder verdünnen weniger. Bei mehr als etwa 150 Zellen pro Quadrat verliert man leicht den Überblick, und die Suspension sollte stärker verdünnt werden. Der Rechner gibt hierzu einen Hinweis.
Für Zellen auf den Begrenzungslinien hat sich eine feste Regel bewährt: Zählen Sie Zellen auf der oberen und linken Linie mit, auf der unteren und rechten nicht. So wird keine Zelle doppelt erfasst. Klumpen sollten vor dem Befüllen durch vorsichtiges Auf- und Abpipettieren aufgelöst werden, sonst wird die Zellzahl zu niedrig geschätzt.
Das Deckglas muss fest aufliegen; die Newtonschen Ringe an den Auflageflächen zeigen den korrekten Sitz. Befüllen Sie die Kammer zügig und ohne Überlaufen, weil sonst die Kammertiefe nicht stimmt. Trypanblau sollte nicht zu lange einwirken, da es mit der Zeit auch lebende Zellen anfärbt. Zählen Sie innerhalb weniger Minuten nach dem Mischen.
Für Bakterien ist die Zählkammer wegen der geringen Größe der Zellen weniger geeignet; dort helfen spezielle Kammern mit geringerer Tiefe oder die Messung der optischen Dichte. Den passenden Rechner dafür finden Sie als OD600-Rechner. Für die Wachstumsplanung einer Kultur eignet sich zusätzlich der Bakterienwachstum-Rechner.
Tipps und typische Fehler
Zellen zählen.
- Ecken: Vier Großquadrate.
- Dichte: 20 bis 150 je Quadrat.
- Linien: Feste Regel.
- Zügig: Nach dem Färben.
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Häufige Fragen
Wie berechne ich Zellen pro ml mit der Neubauer-Kammer?
Mittelwert pro Großquadrat mal Verdünnungsfaktor mal 10.000.
Welcher Verdünnungsfaktor gilt mit Trypanblau?
Bei einer Mischung 1:1 mit Trypanblau der Faktor 2.
Wie viele Quadrate sollte ich zählen?
Üblich sind die vier Eckquadrate; bei wenigen Zellen mehr.
Welche Zellen auf den Linien zähle ich?
Zellen auf oberer und linker Linie zählen, auf unterer und rechter nicht.
Wie lange darf Trypanblau einwirken?
Nur wenige Minuten, sonst färben sich auch lebende Zellen.
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